Kagne

Vous voudrez bien traiter les exercices suivant et poser des questions qui vous viennent à l'esprit dans la rubrique commentaire.

Exercice 1:

Observer le résultat d’une immunodiffusion double (figure ci-dessous), puis répondre aux questions suivantes :

a. Définir le contenu des 5 puits périphériques ; sachant que le puits central contient une anti-IgM humaine et une anti-IgG bovine et seul le puits 3 appartient à l’espèce bovine.

b. Comparer les traits de précipitations entre les puits et conclure :

1 et 2 : …………………………………………………………………………………………

2 et 3 : …………………………………………………………………………………………

1 et 4 : …………………………………………………………………………………………

Exercice 2

On détermine les temps de rétention (tr) au cours d'une chromatographie sur Sephadex,
des protéines suivantes dont on connaît la masse moléculaire (MM) en Daltons (Le débit de la
colonne est de 5 ml / min) :

 1 - Rappeler à quoi correspond le Dalton.

2 - Calculer les volumes d'élution (Ve) correspondants. Porter le log de MM en fonction de
Ve.
3 - Pour la glucokinase, tr = 21 min. Déterminer sa masse moléculaire à l'aide du graphique
précédent.

Exercice 3

 Un mélange d'immunoglobulines G (MM = 160000 Da) et d'albumine sérique bovine (MM = 67000 Da) est déposé sur colonne de séphadex G-100 (limite d'exclusion = 100000 Da). Tracer un diagramme d'élution vraisemblable (DO en fonction de Ve) en indiquant le volume mort.

Exercice 4

Un mélange de trois acides aminés : Asp (pHi = 2,87), Arg (pHi = 10,76) et Leu (pHi = 6), est soumis à une chromatographie sur colonne échangeuse de cations. L'élution est effectuée à l'aide d'un tampon à pH = 6. Dans quel ordre peut-on prévoir la sortie de ces acides aminés ?

Exercice 5

Calculer le pHi de chaque acide aminé. Justifier
Le pHi est calculé en prenant la moyenne des 2 pKA entourant la zone où l’acide aminé est sous forme de 
zwitterion (c'est-à-dire à la fois chargé positivement et chargé négativement)
Pour Tyr , comme pour Asn, pHi ≈ (2 + 9,5)/2 = 5,75
Pour His, pHi ≈ (6 + 9,5)/2 = 7,75
Pour Asp, pHi ≈ (2 + 3,9)/2 = 2,95
Pour Lys, pHi ≈ (9,5 + 10,5)/2 = 10